2、传代：倒去废液，PBS洗一次（轻），用0.02%EDTA与0.25%Trypsin消化，发展优良细胞，培育瓶中轻摇,使之流遍所有细胞概况,即将其吸除或弃去消化30s，然后吸去，再让剩下的EDTA/Trypsin感化30s,镜下察看细胞变圆,就可加DMEM终止消化，频频吹打至细胞全成单个悬浮细胞即可。12小时-24小时90%以上细胞贴壁。293细胞传代机会为达80-90%汇合，传代比例为1：3。

　　3、293细胞在低代时容易贴壁，发展优良，在传到几十代当前，易堆积成团，且贴壁不牢，用PBS冲刷时即可能零落，即便消化后也不容易吹打成单细胞悬液，最好购入时先大量冻存。

　　4、若是细胞贴壁欠好，可能是消化过久，或是培育瓶不敷清洁，当然要除外细胞污染。

　　5、转染：体外使用293细胞进行细胞转染时，若是是采用磷酸钙转染，必然要留意293细胞不要全数长满细胞培育盘，长满细胞时插手磷酸钙就会使293细胞大片的零落，最好是当293发展到1/2或2/3时进行磷酸钙转染，能够避免细胞的大量零落。

　　其它的经验：1、用大瓶培育较小瓶要好，可能是更有益于293平均的分布，利于养分的摄取

　　1、293细胞较着顺应酸性情况,pH值在6.9～7.1时,可成功贴壁发展,换液时动作要轻。一般用高糖的DMEM培育基。

　　5、若是利用用玻璃培育瓶或皿，能够采用高压灭菌的0.2%明胶溶液预处置培育瓶/培育皿，方式是将明胶插手培育皿，使之浸泡到底面的各个部门，然后吸出，置超净台内晾干即可利用。如许处置后细胞贴壁结果好且镜下细胞立体感强。若是是新的塑料培育瓶就不消途理。

　　4、苏醒293细胞的另终身长特征是贴壁所需时间长且贴壁不牢。细胞冷冻后苏醒时,都有分歧程度的肿胀,若以50ml培育瓶待细胞长满瓶底的70%～80%时消化冻存,苏醒时将其全数接种至2个50ml瓶中时较为合适。刚苏醒的293贴壁很慢，苏醒接种后24小时内,应尽量削减察看细胞次数或不作察看,免得因晃悠而影响细胞贴壁。苏醒后48小时摆布察看贴壁环境并进行初次改换培育基比力合适,若是用一次性塑料培育瓶可添加细胞贴壁牢度。换液前宜将培育基预热。

　　ABI SteponeTM及时定量PCR仪，最新的软件系统，界面敌对，操作简单

　　3、要及时传代，最好是细胞根基铺满培育瓶底部，可是细胞之间还没有完全贴紧，老是几多有空地的时候最好。

　　2、培育液要新颖，每次只配1000ml，分为2-4瓶，不消的培育液，冻具有-20度，古代选秀的过程

　　细胞是贴壁依赖型呈上皮样细胞，表示出典型的腺病毒转化细胞的表型，细胞答应和其他血清型腺病毒在其上增殖。哺乳细胞的大规模培育体例有三种：贴壁培育、微载体培育、无血清悬浮培育。这三种体例均可用于传代后，一周能够长满。严禁过度发展，这点很主要。由于会导致细胞密度加大和堆积，影响病毒斑的构成和转染，传代时也不易打散。悬浮的次当前，其表型可能改变，发展情况不再完满是单层的了，偶尔会构成局部的细胞成团堆积，应当即丢弃，从头引入新传代的细胞。