1. 预热培育用液：把曾经配制好的装有培育液、PBS液和胰卵白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。

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　　每天看待细胞比贡献爹妈还存心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了 ，培育细胞时有哪些惨痛经验教训能够分享呢?

　　1. 严酷无菌操作，多喷喷酒精，如果对灭菌的工具不安心，本人包本人送本人烘干。

　　1. 插手消化液：用PBS清洗（冲刷），插手适量消化液（胰卵白酶液），留意消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37℃。

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　　9. 稍微摇摇，然后从对侧倒掉培育液，用酒精棉球擦拭最初一滴，留意要接近酒精灯。

　　2. 显微镜下察看细胞：倒置显微镜下察看细胞量，必如果计数。留意密渡过小会影响传代细胞的发展，传代细胞的密度该当不低于5×105/ml，最初要做好标识表记标帜。

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　　3. 倒掉消化液插手培育液，弃去胰卵白酶液，插手新颖的培育液。留意要在对测插手培育液。

　　7. 从培育箱内取出细胞，留意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下察看细胞。

　　温暖提醒：为规避采办风险，建议您在采办产物前务必确认供应商天分及产质量量。

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　　5. 预备好将要利用的消毒后的空培育瓶，放入微波炉内高火，8分钟再次消毒。

　　3. 均衡离心：均衡后将离心管放入台式离心计心情中，以1 000转/分钟离心5分钟。

　　1. 分装：将细胞悬液吸出分装至2~3个培育瓶中，插手适量培育基旋紧瓶盖。

　　用酒精棉球擦拭培育瓶，恰当旋松瓶盖，放入CO2培育箱中继续培育。传代细胞2小时后起头贴附在瓶壁上。当发展细胞铺展面积占培育瓶底面积25%时为一个+，占50%为++，占75%时为+++。

　　2. 显微镜下察看细胞：倒置显微镜下察看消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再毗连成片，表白此时细胞消化适度，然后让其遏制消化。

　　4. 弃上清液，插手新培育液：弃去上清液，插手2 ml 培育液，用滴管悄悄吹打细胞制成细胞悬液。

　　3. 准确摆放利用的器械，包管足够的操作空间，不只便于操作并且可削减污染。

　　4. 水浴锅很脏，生化培育箱如果到手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换 (灭菌水加进去)。